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          要想更好的使用丁基疏水色譜柱需留意以下事項

          發布時間:2022-06-25瀏覽:54次
           
            丁基疏水色譜柱是一款以粒徑為2.5um的,丁基鍵合無孔型親水性聚合物基質為填充劑的疏水作用色譜柱。適用于蛋白質、單抗、酶等生物大分子的分離分析。由于和藥物安全以及生產成本息息相關,對于重組蛋白藥物(包括單抗)的非均一性分析變得越來越被重視。TSKgelButyl-NPR(4.6mmIDX3.5cm)已經上市超過20年了,它以對蛋白的高速、高分辨率的分離性能為廣大客戶提供了幫助。新上市的Butyl-NPR(4.6mmIDX10cm)色譜柱具有更高的分辨率,可以滿足生物制藥的研究人員對于HPLC色譜柱的分辨率和分離選擇性的更高要求。
            采用具有適度疏水性的填料,以含鹽水溶液作流動相,借助于溶質與固定相間的疏水相互作用實現分離的色譜方法。其保留機理與反相色譜基本相同,所不同的是其固定相的疏水性不如反相固定相強,多為低密度分布的甲基、乙基、丙基、丁基和苯基等。疏水作用色譜主要用于蛋白質的分離與純化。
            丁基疏水色譜柱的使用注意事項:
            1、使用新鮮潔凈的水與乙腈。沖洗系統,確保系統干凈,不含任何緩沖鹽和污染物。
            2、取用色譜柱時避免磕碰掉落。
            3、將丁基疏水色譜柱入口端連接到系統上,柱出口端先不要連接,色譜柱身上有箭頭標明正確流向。
            4、在0.1mL/min流速條件下用純乙腈潤洗色譜柱,然后在2分鐘內將流速升至0.5mL/min。
            5、當溶劑均勻的從柱出口端流出,停流速,將色譜柱出口端接到系統檢測器上(這樣可以避免氣泡進入檢測系統,并且可快速達到基線平衡)。
            6、重啟流速,按照步驟4的方法逐漸提高流速,至常規分析時所使用的流速。
            7、參考柱效測試報告中的方法,使用該流動相條件平衡色譜柱,通常需要使用5-10倍柱體積的流動相,直至壓力與基線穩定。
            8、測試丁基疏水色譜柱柱效。如果沒有柱效測試報告中的分析物,請廠家部門尋求支持,使用合適的濃度與進樣量。柱效結果略低于柱效測試報告屬正常情況。如結果明顯偏低、峰形拖尾,提示色譜柱和/或所使用的液相系統處于非理想狀態,需要進行故障排查。當使用2.1mm內徑色譜柱時,建議優化系統以減少譜帶展寬,包括:使用檢測器微量流通池,減少進樣器loop環體積,使用較小內徑(如0.005''或0.12mm)的系統管路。并確保管路與丁基疏水色譜柱連接恰當、無死體積。當使用小顆粒填料(如2.5μm)短柱進行快速分離時,需要考慮以下因素:
            1、確保管路丁基疏水色譜柱連接恰當、無死體積,盡量優化系統減少譜帶展寬;
            2、提高采樣頻率至10點/秒以上;
            3、較小粒徑的色譜柱產生的柱壓較高,而較小粒徑要達到*色譜效率所需的線速度較高,請根據所用LC系統的實際情況調節流速;
            4、可使用較高的柱溫來補償小顆粒造成的壓力升高,例如40?C。使用雜化顆粒反相色譜柱時,可使用45?C或更高。
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